高通量酵母双杂交CreY2H-seq

服务简介：

  酵母双杂交实验是目前最为广泛使用的绘制蛋白互作的方法之一。此实验的数据有助于丰富蛋白互作的资源库，还可以帮助科研工作者鉴定癌症亚型和可能的与植物病原菌感染相关的子网络。但是大规模的酵母双杂交实验数据采集和重复筛选受到成本和劳动力资源限制。而利用二代测序手段来鉴定蛋白互作的方法使得酵母双杂交筛选变为可行方案。起初科研工作者使用的是条码融合遗传方法（BFG-Y2H），其原理是利用条形码开放阅读框克隆区域的细胞内DNA重组来鉴定互作蛋白，从而允许Y2H阳性克隆被同时合并及测序。但是这种技术由于需要对每个条码诱饵分子和捕获分子分离和测序，所以对于多个诱饵基因比较繁琐。为了更加高效的进行重复筛选，我们开发了Cre报告基因间接调解酵母双杂交系统，并结合二代测序的方法（CreY2H-seq），利用Cre重组酶作为Y2H蛋白互作报告因子，在细胞内通过特异识别蛋白编码序列的loxP位点，共价单向的连接互作的诱饵和捕获质粒。连接的蛋白编码序列充当互作识别DNA分子，结合二代测序手段，从而能够大规模多重复的筛选、监测蛋白互作网络。

服务内容：

  根据客户要求将众多基因一一克隆至Bait和Prey载体上，将两个库共转酵母涂布相应筛选培养基上，筛选阳性结合子、构建二代测序文库、二代测序及数据分析。

实验流程：

1.实验方案的制定；

2.诱饵文库构建及猎物文库构建；

3.Prey文库&Bait文库mating；

4.阳性克隆子收集及质粒大提；

5.抽提质粒文库电转DH10B；

6.抽提质粒大提及酶切；

7.二代测序。

客户提供：

足量新鲜样品及Bait&Prey序列信息。

交付内容：

1.原始数据、结果图片；

2.阳性克隆子；

3.阳性克隆质粒；

4.酶切样品；

5.二代测序原始数据及生信分析。

参考文献：

CrY2H-seq: a massively multiplexed assay for deep-coverage interactome mapping Development and application of a recombination-based library versus library high- throughput yeast two-hybrid (RLL-Y2H) screening system